Предрасположенность к алкоголизму у мужчин: роль аллельных генов

Алкоголизм, или синдром алкогольной зависимости – мультифакторное заболевание, в основе которого лежит взаимодействие биологических, психогенных и социальных факторов.

Теоретической основой профилактики мультифакторных заболеваний является концепция факторов риска. ФР включает как индивидуальные особенности организма, так и внешние воздействия и/или их взаимодействия. ФР приводят к увеличению риска возникновения заболевания, его прогрессии и неблагоприятного исхода. Помимо средовых и традиционных биологических факторов риска, выявляемых анамнестически и клинически, существует группа генетических ФР, отвечающая за наследственную предрасположенность к возникновению и развитию заболевания, позволяющая сформировать группы риска в обследованной популяции и проводить профилактику лечения заболевания до начала дебютов его проявления.

Исследования на близнецовых парах выявили, что генетический компонент играет важную роль в формировании предрасположенности к САЗ. Многочисленные эпидемиологические исследования показывают, что вклад генетических факторов в риск развития САЗ достигает 50-70% от общего риска заболевания. В настоящее время достоверно доказан вклад аллельных вариантов генов алкогольметаболизирующих ферментов: алкогольдегидрогеназ и альдегиддегидрогеназ в развитие САЗ.

Проводимые в настоящее время ассоциативные исследования свидетельствуют, что в формирование алкогольной зависимости вовлечены также полиморфные варианты генов системы нейротрансмиссии, оказывающие влияние на нейрохимические процессы в мозге. Основное внимание направлено на изучение генов, кодирующих белки нейромедиаторных систем стволовых и лимбических структур головного мозга, тесно связанных с эмоциональными и когнитивными процессами. Эти процессы формируют систему подкрепления мозга, которая участвует в регуляции:

• эмоционального состояния;

• мотивационной сферы;

• психофизического тонуса;

• адаптации к окружающей среде.

Анализ данных литературы показывает, что последствия токсического действия алкоголя на организм ведет к серьезной перестройке целого ряда нейромедиаторных систем, прежде всего дофаминергической и у-аминомасляная кислота (ГАМКергической), играющих основную роль в регуляции моторной сферы и поведенческих реакций.

Можно предположить, что аллельные варианты генов системы нейротрансмиссии могут вносить вклад в формирование САЗ и влиять на клинические особенности течения данного заболевания.

Исследование влияния аллельных генов на САЗ

Целью настоящего исследования было выявление генетических факторов риска в развитии САЗ у мужчин.

У пациентов с САЗ и лиц контрольной группы было проведено молекулярно-генетическое исследование распределения следующих аллельных вариантов генов, продукты которых участвуют в нейротрансмиссии:

• VNTR SLC6A3 – вариабельное число тандемных повторов 3'-нетранслируемого региона гена дофаминового транспортера DAT1;

• Taq1 DRD2 – рестрикционный полиморфизм в 3'-нетранслируемом регионе гена рецептора дофамина D2;

• -2922 С NR4A2 – вариабельное количество С в 5'-нетранслируемой области гена нейронального транскрипционного фактора дофаминового транспортера NURR1;

• L/S SLC6A4 – инсерция или делеция сегмента в 44 п.о. в промоторном районе гена серотонинового транспортера;

• 7 ОНП GABRA2 – семи одиночных нуклеотидных полиморфизмов гена а2 субтипа рецептора ГАМК GABRA2;

• 13 ОНП GAD65 – 13 ОНП гена глутаматдекарбоксилазы-65 GAD65, продукт которого участвует в синтезе ГАМК, отвечает за декарбоксилирования L-глутамата.

Материалы и методы

Обследованы 250 мужчин с диагнозом «алкогольная зависимость» по критериям МКБ-10, относящихся к европеоидной расе и постоянно проживающих на территории России, не связанных между собой узами родства. Пациенты в период обследования находились на лечении в стационаре Ленинградского областного наркологического диспансера.

Контрольная выборка была сформирована согласно стандартному протоколу из 195 практически здоровых мужчин той же возрастной группы, обследованных на базе кафедры факультетской терапии СПбГМУ им. И.П. Павлова и кафедры военно-морской и общей терапии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова, из лиц, не состоящих на учете у психиатра или нарколога и отрицавших злоупотребление алкоголем, по данным структурированного интервью и ретроспективного анализа употребления алкоголя.

Геномную ДНК выделяли из лейкоцитов периферической крови методом фенольно-хлороформной экстракции, растворяли в воде и хранили при температуре – 20°С.

Для идентификации аллельных вариантов генов SLC6A3, DRD2, SLC6A4 и NR4A2 использовали методы на основе полимеразной цепной реакции с последующим рестрикционным анализом. ПЦР проводили в 20 мкл реакционной смеси, содержащей 67 мМ Tris-HCl, 16,6 мМ 2SO4, 0,1% Triton X-100, 2,0 мМ MgCl2, 0,1% DMSO, 200 мкл dNTP, по 50 пмоль каждого праймера, 2 ед. Taq ДНК полимеразы и 1 мкг геномной ДНК. Продукты рестрикционного анализа подвергались электрофоретическому разделению в полиакриламидном геле с последующей окраской этидием бромидом и визуализацией в ультрафиолете.

Для генотипирования 7 однонуклеотидных полиморфизмов гена GABRA2 и 13 ОНП гена GAD65 был использован метод ПЦР в реальном времени.

Изучаемые в этой работе ОНП были выбраны на основании полученных ассоциаций J. Covault и соавт. между носительством определенных аллелей гена GABRA2 и развитием САЗ в американской популяции. Исследуемые ОНП располагаются в гене от центра до 3-нетранслируемой области.

Всего было исследовано 13 ОНП, расположенных в гене GAD65. Четыре ОНП-маркера были получены путем сканирования гена GAD65 на наличие мутаций при использовании системы для выявления мутаций Transgenomic Wave dHPLC. Характеристики 7 ОНП были предоставлены сервисом Applied Biosystem's Assay-On-Demand. Так как аллельный вариант GAD65 -243 A>G имеет естественный сайт для эндонуклеазы DraI, некоторое количество образцов было прогенотипировано двумя методами TaqMan real-time PCR и ПЦР с последующей рестрикцией, результаты полностью совпали.

Оценку генетических вариантов генов GABRA2 и GAD65 проводили с использованием флюоресцентного зонда TaqMan на оборудовании ABI 7900 НТ. ПЦР-амплификацию анализируемых образцов проводили в 96-луночных планшетах при температурном режиме 94°С в течение 15 с и 60°С – 60 с, 36 циклов. Полученную флюоресценцию считывали при помощи пакета программы v1.9 к ABI 7900 НТ. В экспериментах были использованы зонды и олигонуклеотиды фирмы PE Biosystems, их структура и характеристики были взяты из коллекции Applied Biosystems's Assay-on-Demand. Все образцы были проанализированы в дублях. Ошибка метода составила менее 0,2%.

Результаты работы анализировали, используя стандартные пакеты статистических программ MathCAD 8 и SPSS 12, статистический пакет UNPHASED программы COCAPHASE. Для сравнения распределения изучаемых генотипов в группе больных САЗ и в контроле пользовались критерием х2. Относительный риск развития заболевания вычисляли с 95% доверительным интервалом.

Результаты и обсуждение

Оценка вклада аллельных вариантов генов SLC6A3, DRD2, SLC6A4 и NR4A2 в формирование развития САЗ

У группы больных САЗ и контроля было изучено распределение следующих аллельных вариантов: Taq1 A полиморфизма гена рецептора дофамина – аллели А1 и А2, вариабельное число тандемных повторов в 3'-нетранслируемой области гена дофаминового транспортера – количество повторов от 7 до 12, аллельные варианты – 2922C в 5'-нетранслируемой области гена ядерного рецептора 1 – аллели С2 и С3, инсерционно/делеционный полиморфизм в промоторной области гена серотонинового транспортера – аллели S и L.

При анализе распределения аллельных вариантов полиморфизма VNTR 3'-нетранслируемой области гена SLC6A3 всего было обнаружено семь различных генотипов: 7/10; 8/10; 9/9; 9/10; 9/11; 10/10; 10/11. Во всех исследуемых группах преобладали генотипы 9/9 , 9/10, 10/10 и, соответственно, аллели 9 и 10. Генотипы с аллельными вариантами 7, 8 и 11 встречались крайне редко. Полученные в исследовании результаты по распределению частот генотипов и аллелей по аллельным вариантам VNTR полиморфизма гена SLC6A3 согласуются с данными, полученными для популяций европейцев, американцев европейского и африканского происхождения и отечественной популяции на примере русских, проживающих в Уфе.

В характере распределения изученных генотипов гена SLC6A3 между группой лиц с САЗ и контролем достоверные различия не обнаружены. Очевидное снижение плотности дофаминового транспортера на пресинаптической мембране нейрона было обнаружено у лиц, страдающих САЗ, в период употребления алкоголя. Недавние исследования выявили ассоциацию между определенными аллелями VNTR полиморфизма в 3-нетранслируемом регионе гена SLC6A3 и уровнем транскрипции гена. Ряд работ выявил ассоциацию аллельных вариантов гена SLC6A3 с САЗ. Так, аллель с 9 единицами повтора, в первую очередь в гомозиготном состоянии, ассоциируют с ранней формой САЗ и с развитием острого алкогольного психоза. Однако результаты данного исследования не подтверждают гипотезу об ассоциации аллельных вариантов гена SLC6A3 с развитием САЗ, так же как и результаты ряда других исследователей.

В исследуемых группах преобладал генотип А2/А2. Сравнительный анализ распределения генотипов гена DRD2 не выявил достоверных различий между контрольной группой и группой лиц с САЗ.

Ассоциация аллельных вариантов Тад1 гена DRD2 с риском развития САЗ является точкой серьезных противоречий. Из всех рассматриваемых генетических ФР САЗ среди генов нейротрансмиссии Taq1 аллельный полиморфизм является наиболее изученным. Однако результаты носят явно противоречивый характер и не позволяют сделать однозначного заключения о связи аллелей гена DRD2 с развитием САЗ. Логично предположить, что полиморфизмы в гене, кодирующем рецептор дофамина D2, могут влиять на работу всей системы дофаминергической нейротрансмиссии. Blum и соавт. первыми показали ассоциацию между носительством аллеля А1 гена DRD2 и развитием тяжелой формы алкоголизма. В нескольких независимых популяциях был доказан вклад аллельного варианта A1 гена DRD2 в риск развития алкоголизма, кокаиновой и опиоидной зависимости. В работе А.РГалееевой и соавт. была обнаружена ассоциация аллеля А2 с острым алкогольным психозом у больных татарского происхождения из Башкортостана. Также было показано снижение зрелого D2-рецепто- ра в мозге и периферических лимфоцитах у носителей аллеля А1 по сравнению с носителями аллеля А2.

Однако надо отметить, что существует ряд работ, в которых не была выявлена ассоциация ни одного из аллелей гена DRD2 с алкоголизмом, что согласуется с полученными нами результатами.

При анализе распределения частот генотипов и аллелей гена NR4A2 во всех исследуемых группах преобладал генотип С3С3. Распределение -2922 С аллельного варианта гена NR4A2 ранее было исследовано H. Ishiguro и соавт. на японской популяции. Однако в исследованной ими группе преобладал генотип С2С2. До настоящего времени частота распределения -2922 С аллельного варианта в европейских популяциях, а также среди белого населения США и Канады оставалась неизученной. Наблюдаемое в ходе исследования превалирование генотипа С3С3 среди жителей Северо-Западного региона России позволяет предположить, что распределение генотипов данного аллельного варианта гена NR4A2 кардинально отличается в европейской популяции, от лиц монголоидной расы.

Отечественными исследователями выявлено превалирование генотипа С3С3 в общей группе лиц САЗ по сравнению с контролем. Риск развития САЗ у мужчин-носителей генотипа С3С3 гена NR4A2 возрастает в 1,5 раза.

Для более детальной оценки роли данного аллельного варианта в формировании предрасположенности к САЗ 250 пациентов разделили на подгруппы по трем принципам:

1. С учетом генеалогического анамнеза.

2. По возрасту начала заболевания.

3. По наличию или отсутствию депрессивного компонента в составе клинической картины заболевания.

Все выделенные подгруппы были сравнены с контрольной группой и не сравнивались между собой.

У мужчин, страдающих алкоголизмом с отягощенной наследственностью, по сравнению с контрольной группой были выявлены достоверные различия в распределении генотипов гена NR4A2. Частота генотипа С3С3 в общей группе пациентов возросла практически в 2 раза. В остальных подгруппах больных с САЗ не было выявлено различий в распределении генотипов по аллельным вариантам С2/С3 гена NR4A2 по сравнению с контролем. Таким образом, нами выявлена достоверная ассоциация генотипа С3С3 гена NR4A2 с САЗ у мужчин.

Ген NR4A2 кодирует транскрипционный фактор Nurr1, который играет важную роль в процессах дифференцировки дофаминергических нейронов в эмбриогенезе и постмитотическом развитии дофаминовых клеток. Нокаутные по гену мыши умирали вскоре после рождения, у них полностью отсутствовали дофаминергические нейроны среднего мозга, однако другие катехоламинергические группы клеток были сохранены. Во взрослой ткани транскрипционный фактор Nurr1, кодируемый геном NR4A2, играет важную роль, модулируя генетическую транскрипцию ряда генов дофаминергической системы. Использование чиповой технологии показало, что конститутивная и индуцибельная экспрессия гена NR4A2 является ключевым регулятором синтеза белков дофаминергической системы, включая рецепторы дофамина, а-синуклеин, дофаминовый транспортер.

Результаты ряда исследований указывают на вовлеченность ядерного транскрипционного фактора Nurr1 в патогенез ряда неврологических и психических заболеваний, связанных с дисфункцией дофаминергической системы. Совсем недавно показано снижение уровня этого белка в нейронах мозга больных шизофренией и биполярным заболеванием. В кодирующей области гена NR4A2 описаны редкие гетерозиготные мутации, приводящие к развитию болезни Паркинсона, шизофрении и маниакально-депрессивного психоза. Аллельный вариант в шестом интроне этого гена ассоциирован с повышенным риском развития спорадических форм болезни Паркинсона. Кодирующая область гена крайне консервативна – нуклеотидная последовательность кодирующей области гена NR4A2 не различалась у 226 человек.

Исследования по анализу распределений аллельных вариантов в регуляторных областях гена NR4A2 в различных популяциях и оценки их вклада в развитие САЗ только начинаются. В единственной работе Ishiguro и соавт., посвященной данной теме, показана ассоциация между носительством гаплотипа, включающего аллель С3 полиморфизма -2922 2-3 гена NR4A2, и формированием САЗ. В нашем исследовании впервые показан независимый вклад генотипа С3С3 гена NR4A2 в формирование предрасположенности к САЗ. Убедительные данные о вовлеченности локуса, содержащего ген NR4A2, в формирование алкогольной зависимости получены на мышах. Мыши с гетерозиготным нокаутом гена NR4A2 не могут потреблять высокие дозы этанола в отличие от мышей дикого типа. Ген NR4A2 у мышей расположен на 2-й хромосоме в локусе q345cM, именно в том регионе, где ранее был картирован локус предпочтения алкоголя у мышей линии С57БЬ/6. Кроме того, у этой же линии мышей, предпочитающих этанол, в промоторной области гена были обнаружены динуклеотидные маркеры Т-повторы в положении -2645 и СА-повторы в положении 1107, длина которых отличалась от таковой у мышей линии DBA/2. У линии мышей, предпочитающих алкоголь, длина этих динуклеотидных повторов составляла 28 GT-повторов и 25 СА-повторов соответственно, в то время как у мышей линии DBA/2 длина каждого из повторов равнялась 17. Участок промоторной области гена NR4A2 человека в области -2000, -3000 высокогомологичен нуклеотидной последовательности этого региона гена NR4A2 мышей. Длина GT-повторов у человека составляет 25, в то время как СА-повторы не обнаружены. Не выявлено влияние GT-повторов в -2645 районе гена NR4A2 на экспрессию гена, в то время как влияние на экспрессию гена NR4A2 исследованных нами аллельных вариантов -2922С изучено не было. Можно предположить, что динуклеотидные GT-повторы, а также аллельные варианты -2922С гена NR4A2 человека могут участвовать в регуляции транскрипции, в частности определенных изоформ белка Nurr1.

При анализе распределения частот генотипов и аллелей Ь полиморфизма промоторной области гена SLC6A4 достоверных различий не обнаружено. При выделении подгруппы лиц, страдающих САЗ с депрессивным компонентом в анамнезе, по сравнению с контрольной группой была выявлена ассоциация носительства аллеля Ь с САЗ, отягощенным депрессией. Риск развития депрессивных состояний у мужчин, страдающих САЗ, с генотипами ЬЬ и LS гена SLC6A4 возрастал в 2,4 раза, ОР=2,4.

Серотониновый транспортер регулирует уровень серотонина в синаптической щели. Ген серотонинового транспортера мыши расположен в локусе, картированном ранее как локус предпочтения алкоголя. У больных САЗ и детей таких больных был обнаружен повышенный захват серотонина тромбоцитами, на мембране которых также экспрессирован серотониновый транспортер. Все вышесказанное способствовало интенсивному поиску ассоциаций аллельных вариантов гена SLC6A4 человека с САЗ. В промоторной области гена SLC6A4 расположен функционально значимый полиморфизм. Было показано, что аллель S обусловливает более низкий уровень транскрипции гена и синтеза белка. Лица с генотипом ЬЬ характеризовались пониженным содержанием серотонина в пресинаптической щели. Данный факт объясняет продемонстрированную в ряде работ ассоциацию между носительством генотипа ЬЬ гена SLC6A4 и риском развития депрессии и ряда других заболеваний, провоцирующим фактором которых являются нейропсихические расстройства и эмоциональные стрессы. Роль гена SLC6A4 в формировании САЗ противоречива, поскольку исследования показали ассоциацию с развитием САЗ как Ь-аллеля, так и S-аллеля.

Исследование вклада ОНП гена а2-субъединицы рецептора ГАМК GABRA2 в риск развития САЗ

В настоящее исследование вошли семь описанных ранее ОНП, локализованных в кластере GABRA на хромосоме 4. Пять из исследованных ОНП локализовались в интронах гена GABRA2, один, не приводящий к аминокислотной замене ОНП – в пятом экзоне и один в 5'- фланкирующем регионе гена GABRG1.

Для двух из семи ОНП, проанализированных в проведенном исследовании, показана достоверная ассоциация с формированием предрасположенности к САЗ у мужчин. В каждом случае аллели с меньшей частотой встречаемости в популяции были ассоциированы с риском развития САЗ. Был идентифицирован общий по ОНП 1-6 гаплотип, который был представлен с частотой 0,37 и 0,48 в контрольной группе и группе больных САЗ соответственно. Анализ целого блока с использованием шести степеней свободы показал только тенденцию к наличию достоверности, при использовании модуля программы COCAPHASE статистического пакета UNPHASED). При использовании двух степеней исследователи получали лучшее значения р. Так, при комбинации ОНП 3 и 4р=0,04, при ОНП 4 и 5 р=0,03 и при ОНП 5 и 6 р=0,05.

Основные метаболические циклы ГАМКергической системы локализованы в вентральной тегментальной области среднего мозга, тесно связанной с эмоциональными и когнитивными процессами. Одной из функций изучаемой системы является ингибирование освобождаемого дофамина из дофаминергических нейронов, локализованных в данной области мозга. Определенно доказано, что важная роль в индукции САЗ принадлежит ГАМКергической системе, хотя тормозные функции последней носят более универсальный, менее специфический характер, чем функции возбуждающих нейромедиаторных систем. Это отражает, в частности, тот факт, что доля ГАМКергических терминалей в мозге является наибольшей. Подавление этой системы позволяет понять устойчивость патологических влечений. Полагают, что ГАМКА-рецепторы являются медиаторами многих эффектов, опосредованных воздействием этанола на организм. Так, например, введение крысам агониста ГАМКА-рецептора увеличивало прием алкоголя у животных, тогда как антагонисты к этим рецепторам ослабляли тягу к алкоголю.

Некоторые исследования указывают, что чувствительность ГАМКА-рецепторов к этанолу зависит от фосфорилирования рецептора или присутствия определенных субъединиц в его составе. ГАМКА-рецепторы состоят из 5 субъединиц, кодируемых 19 генами. Роль некоторых генов, кодирующих субъединицы ГАМКА-рецептора, в формировании САЗ была определенно доказана. В связи с этим наиболее широко был оценен вклад гена субъединицы а6 в развитие САЗ. Показано, что определенные аллельные варианты гена GABRA6 могут влиять на интенсивность ответа на алкоголь всего организма. Аминокислотная замена Pro385Ser гена GABRA6 ассоциирована с низким ответом на алкоголь и повышением риска развития САЗ. Ассоциация аллельных вариантов гена GABRA6 с САЗ также продемонстрирована в работах Сандера и Чанга. Была получена ассоциация с развитием САЗ носительства определенного аллельного варианта гена |31-субъединицы ГАМКА-рецептора АВИВ1. Необходимо отметить неоднозначность результатов по исследованию вовлеченности локуса генов ГАМКА-рецептора в формирование САЗ.

Ученые выявили ассоциацию генетических вариантов гена GABRA2 с САЗ у мужчин. Раннее в работе исследователей группы COGA при использовании технологии полного сканирования генома было установлено неравновесное сцепление САЗ с локусом 4р13-12 генного кластера рецептора ГАМКа, содержащего, в том числе и ген GABRA2. В 2004 г. вышли две работы американских коллег, в которых показана ассоциация некоторых аллельных вариантов и гаплотипов, включающих ОНП, изучаемые в ходе данного исследования, гена GABRA2 с формированием САЗ при анализе американской популяции. Частота изученных генетических вариантов гена GABRA2 в российской и американской популяциях не различалась. Следовательно, определенные генетические варианты гена GABRA2 могут быть рассмотрены в качестве фактора риска развития САЗ в остальных популяциях европейского происхождения, хотя общие средовые факторы, такие как, например, воздействие алкоголя и среднее количество потребления алкоголя и социальные условия могут сильно различаться между популяциями.

Можно предположить, что исследованные ОНП гена GABRA2 могут влиять на сплайсинг, изменяя стабильность мРНК, тем самым увеличивая уровень экспрессии гена GABRA2. Есть данные в которых исследователи показали ассоциацию между носительством аллельных вариантов гена GABRA2 и уровнем р-ритма биоэлектрической активности мозга, полученных на основе ЭЭГ, доказывая, что различные генетические варианты данного гена могут быть связаны с врожденной физиологией мозга. Работы на крысах с селективным нокаутом генов а1-, а2-, а3- и а5-субъединиц рецептора ГАМКА указывают, что именно а2-субъединица участвует в анксиолитическом действии диазепама. Полученные данные представляют интерес в процессе изучения механизма ответа организма на анксиолитические агенты, такие как диазепам или алкоголь.

В заключение можно отметить, что два из семи изученных полиморфных вариантов гена GABRA2, локализованных в интроне 6 и экзоне 5, являются ФР развития САЗ и, предположительно, влияют на сплайсинг, стабильность мРНК, экспрессию рецептора и как следствие на фармакодинамику этанола.

Исследование вклада ОНП гена глутаматдекарбоксилазы-65 GAD65 в риск развития САЗ

На первом этапе работы ген GAD65 был скринирован с использованием методов dHPLC и прямого секвенирования в группе из 96 человек с целью выявления мутационных изменений. Выявлено 13 ОНП и оценен их вклад в развитие САЗ.

Распределение выявленных 13 ОНП гена GAD65 было проанализировано среди контрольной группы. Исследованные ОНП локализованы в 5'- и 3'- фланкирующих областях гена GAD65, а также в его интронах и экзонах. Результаты представлены в табл. 6. С наибольшей частотой в контрольной группе был представлен ОНП +62623 С, а такие ОНП, как +7812 G>A и +52326 С>Т, не встречались среди лиц контрольной группы.

При анализе распределения генотипов и аллелей 9 ОНП гена GAD65 у 113 больных САЗ и 100 лиц контрольной группы достоверные различия по сравнению с контрольной группой были обнаружены только для ОНП -243 G>A. Аллель с меньшей частотой встречаемости в популяции А был ассоциирован с риском развития САЗ. При этом следует отметить, что при анализе аллельного распределения двух других ОНП была показана только тенденция к возникновению ассоциации с САЗ при р<0,1, когда как анализ распределения генотипов данных ОНП показал достоверную ассоциацию. На основании полученных результатов ученые увеличили группу больных САЗ на 138 человек и проскринировали в ней ОНП -243 G>A. Частота распределения генотипов в позиции -243 в дополнительно рассмотренной группе пациентов с САЗ составила GG=0,04, GA=0,20, AA=0,76, при аллельной частоте G=0,14 и A=0,86. Частотные распределения между первоначально рассмотренной группой и дополнительной существенно не различались. Результаты были объединены. В общей группе больных САЗ распределение генотипов для ОНП -243 G>A GAD65 гена составило GG=0,03, GA=0,20, AA=0,77 при частоте аллелей G=0,13 и A=0,87. При оценке вклада изучаемого полиморфного варианта в риск развития САЗ достоверные различия в распределение аллелей сохранились – р=0,038, а различия в распределении генотипов увеличились – р=0,0009. ОР развития заболевания составил 2,0 с 95% ДИ 1,39-3,00 при df=1, р<0,004.

Исследованные аллельные варианты -243 A>G промоторной области гена GAD65G являются функционально значимыми. Аллель G ассоциирован с 6-кратным увеличением транскрипционной активности гена GAD65 in vitro. Наличие этого аллеля приводит к усилению связывания транскрипционных факторов с промоторной областью гена GAD65. Фермент глутаматдекарбоксилаза-65 участвует в синтезе ГАМК в нейронах мозга. Мыши с делецией гена GAD65 проявляют поведенческие отличия, связанные с повышенной тревожностью на открытом пространстве, уменьшением ответа на введение бензодиазепина по сравнению с животными дикого типа.

Выявленная в ходе исследования ассоциация генотипа АА гена GAD65 с САЗ у мужчин в Северо-Западном регионе России не была подтверждена в исследовании американских коллег на примере афро-американской популяции и американской популяции европейского происхождения. Различия, выявленные при исследовании вклада аллельных вариантов -243 A>G гена GAD65 в риск развития САЗ на американской и российской популяциях, могут иметь популяционную природу или быть связанными с различиями в тяжести заболевания. Для выявления вклада данного аллельного варианта в риск развития САЗ необходимы дальнейшие исследования.

Таким образом, на основании данного исследования можно сделать следующие заключения:

• Генотип С3С3 гена NR4A2, генотип AА гена GAD65, аллели A82730 и A76130 гена GABRA2 являются независимыми факторами риска развития САЗ у мужчин.

• Аллельные варианты гена NR4A2 влияют на клинические особенности САЗ: генотип С3С3 гена NR4A2 увеличивает риск развития САЗ у мужчин с отягощенным семейным анамнезом по данному заболеванию, но не влияет на возраст начала заболевания и наличие депрессивной компоненты.